| نویسندگان | روح اله نخعی سیستانی,مرضیه صالحی سیاوشانی |
|---|
| همایش | سومین کنفرانس ملی علوم و تکنولوژیهای نوین زیستی |
|---|
| تاریخ برگزاری همایش | ۲۰۱۷-۵-۱۸ |
|---|
| محل برگزاری همایش | ملایر |
|---|
| نوع ارائه | سخنرانی |
|---|
| سطح همایش | ملی |
|---|
چکیده مقاله
ژنهای HLA بسیار پلی مورفیسم هستند و رمز کنندهی پروتئینهایی هستند که در پاسخهای ایمنی نقشهای حیاتی دارند. ملکولهای کلاس دو HLA ها شامل: DP، DQ و DR هستند که هریک ترکیبی از دو پروتئین آلفا و بتا میباشند. هریک از زنجیرههای آلفا و بتا از طریق ژنهای مجزایی رمز میشوند (به جز زنجیرهی آلفا از لکوس DR). برای برخی از ژنها در این منطقه هزاران آلل توصیف شده است. مطالعه بر روی ژنهای HLA اطلاعات سودمندی در ارتباط با اهدای مغز استخوان، پزشکی قانونی، اطلاعات مرتبط با بیماریها و طراحی واکسن علیه تومورها و بیماریهای خود ایمن میدهد. از آنجا که تعیین ژنوتیپ HLA اهمیت بسزایی در مباحث پیوند و همچنین برخی از بیماریهای مرتبط با سیستم ایمنی دارد، مهم است که بتوان سیستمهای ساده و در عین حال مؤثری را جهت تعیین آللهای آنها طراحی نمود. سیستمهای مبتنی بر PCR اگرچه از دو شرط فوق برخوردارند اما به دلیل پلیمورفیسم بسیار بالای این لکوسها طراحی یک سیستم PCR اختصتصی آللی بمنظور تعیین محتوای آللی این لکوسها مشکل به نظر میرسد. از اینرو، در این مطالعه روشی برای طراحی پرایمرهای PCR جهت انجام PCR اختصاصی آللی با قابلیت شناسایی گروه آللی DQB1*03 بکار گرفته شد. در این روش، ابتدا توالی بخش اگزونی 2 تا 4 از کل آللهای DQB1 از پایگاه دادهای dbMHC اخذ شد. سپس برای هر یک از گروههای آللی این لکوس توالی توافقی بدست آمد، و با همردیفی چندگانهی این توالیهای توافقی، ناحیهی مناسب جهت طراحی پرایمر انتخاب شد. پرایمرهای طراحی شده بمنظور بررسی توانایی تکثیر و بهینه سازی شرایط PCR بر روی DNAی استخراج شده از ردهی سلولی K562 که دارای آلل مورد نظر است آزمایش گردید و نشان داده شد که توانایی تکثیر محصول 154 جفت بازی هدف را دارند. بعلاوه نشان داده شد که این پرایمرها، نمونههایی که از قبل میدانستیم فاقد آلل DQB1*03 هستند را تکثیر نمیکنند. سپس، پرایمرهای طراحی شده، بر روی 168 نمونه از خون افراد مورد بررسی قرار گرفت تا توانایی این سیستم در نمونههای حقیقی نیز مورد بررسی قرار گیرد. بدین منظور، خون افراد در لوله های حاوی اتیلن دیآمین تترا استیک اسید (EDTA) جمع آوری گردید. پس از انتقال خون حاوی EDTA به آزمایشگاه، با استفاده از روش salting out، DNA استخراج گردید. میانگین غلظت DNA استخراج شده 40 ng در میکرولیتر بود. نتایج مطالعه نشان داد که در این 168 نمونهی مورد بررسی، 110 نفر واجد و 58 نفر فاقد آلل مورد نظر بودند. بنابراین %65 افراد این نمونه دارای آللDQB1*03 هستند.